流式細(xì)胞術(shù)
流式細(xì)胞分析術(shù)(Flow cyrometry, FCM)是一種先進(jìn)的細(xì)胞定性定量分析技術(shù),已廣泛用于研究和臨床實(shí)踐中。
原理
一束單色光(通常是激光)照射流體力學(xué)聚焦的一股流體上。若干個(gè)檢測器瞄向流束和激光相交的這個(gè)點(diǎn),其中一個(gè)和激光在同一直線上(稱作前散射,F(xiàn)SC),其它幾個(gè)和激光垂直(旁散射,SSC和一個(gè)或幾個(gè)熒光監(jiān)測器),前散射與細(xì)胞體積相關(guān),而旁散射取決于微粒的內(nèi)部復(fù)雜程度(比如核的形狀、胞質(zhì)內(nèi)顆粒的種類或者膜的粗糙程度)。當(dāng)每個(gè)懸浮微粒通過光束時(shí)會(huì)按某種方式產(chǎn)生光散射,同時(shí)所帶有的熒光化合物被激發(fā)并發(fā)射出波長大于激發(fā)光的熒光。這些散射光和熒光的組合數(shù)據(jù)被檢測器記錄,根據(jù)各檢測器亮度的波動(dòng)(每個(gè)細(xì)胞會(huì)顯出一個(gè)散射或熒光的峰)就能夠推算出每個(gè)顆粒的物理和化學(xué)性質(zhì),從而對(duì)細(xì)胞(或微粒)的理化、生物學(xué)性狀和功能狀態(tài)等進(jìn)行定性或定量檢測,方法簡便快捷,靈敏度高。
應(yīng)用
流式細(xì)胞術(shù)在很多領(lǐng)域中都有應(yīng)用,包括分子生物學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)、海洋生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等。特別是使用熒光標(biāo)記的特異性抗體與靶細(xì)胞上的抗原結(jié)合,能夠通過流式細(xì)胞儀研究這些細(xì)胞的特別信息,在生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)(尤其是器官移植、血液學(xué)、腫瘤免疫學(xué)和化療、遺傳學(xué))領(lǐng)域中具有很廣泛的應(yīng)用。現(xiàn)代的流式細(xì)胞儀具有多個(gè)激光和熒光檢測器,可以用于多色熒光抗體標(biāo)記檢測,以便在表現(xiàn)型中更準(zhǔn)確地區(qū)別某個(gè)靶群體。
同時(shí)流式細(xì)胞儀也是很有用的分選儀器。當(dāng)細(xì)胞或微粒通過時(shí),可以被選擇性地加上某種電荷,并在通過電磁場后偏轉(zhuǎn),從不同出口流出。這樣就可以從一個(gè)混合物中高速(理論上可達(dá)到每秒大約9萬個(gè)細(xì)胞)準(zhǔn)確地分離開四類細(xì)胞。
量子點(diǎn)應(yīng)用
量子點(diǎn)作為新型熒光納米材料,具有熒光效率高、穩(wěn)定性高、Stockes位移較大、發(fā)射光譜窄而對(duì)稱、單一波長多色激發(fā)等諸多優(yōu)秀的熒光特性,與流式細(xì)胞術(shù)相結(jié)合,可實(shí)現(xiàn)更高靈敏度的檢測,并簡化儀器光源和檢測系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與成本,是傳統(tǒng)熒光材料的有益補(bǔ)充和替代,在流式細(xì)胞分析中具有廣闊的應(yīng)用前景。
圖1,流式細(xì)胞儀(flow cytometer)
QD-FCM應(yīng)用實(shí)例:
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