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熒光顯微成像

顯微鏡是生命科學研究領域中一個重要的工具,而放大倍率和分辨率是顯微鏡的重要指標。一般來說,放大倍率越大,分辨率會更高,但普通的亮場顯微鏡由于樣品中不同組分之間的差異較小,因此大放大倍率下,分辨率不會明顯提高,必須通過特定的染色方法進行觀察(圖1)。通過合適的激發光源和濾光系統配合,熒光顯微鏡可以達到光學顯微鏡的分辨率極限。

圖1,亮場顯微鏡(左)與熒光顯微鏡對相同樣本的觀察結果比較。

量子點標記探針

通過使用熒光探針,包括免疫熒光探針如量子點-抗體偶聯產物或核酸熒光探針如量子點-寡聚脫氧核酸偶聯產物,基于抗原-抗體特異性結合或核酸序列互補原理,標記細胞表面或內部的目標物質。然后使用熒光顯微鏡,使用特定波長激發熒光物質顯色,以獲得目標物質在細胞微觀環境中的分布情況。傳統的熒光染料,由于激發波長不同以及發射波半峰寬較大易相互干擾,因此一般需要一組濾鏡濾色拍攝多張圖片再進行疊加,同時檢測的目標物質數量也受到局限。同時一般的熒光染料,其光穩定性差,易產生光漂白,進行活細胞染色時長時間或多次動態觀察比較困難。而量子點由于優異的多色激發和耐光漂白特性,應用不同色彩的量子點可用一個波長激發出多種不同波長且峰寬窄而對稱的熒光,不僅簡化了熒光顯微鏡的設計制造成本,同時豐富了多元分析體系,并且長時間激發熒光衰減很小,動態觀察的可比性很強。


量子點顯微成像實例:

 


圖2,羊抗鼠-QD605(左圖,Cat: Q2104/Q2104a)和親和素-QD605(右圖,Cat: 1104/Q1104a)通過抗微管蛋白一抗對細胞骨架的免疫熒光染色顯微照片。



 

圖3,MC3T3-E1細胞p-Smad1/5(1:40)蛋白(紅色,羊抗鼠QD605,Cat: Q2104/Q2104a)和核(藍色,DAPI)的免疫熒光染色顯微照片及疊加合成


圖4,MDA-MB-231細胞分別轉染5nm QD605-let7a(核酸量子點探針,定制產品,上排圖示)和100nm Cy3標記let7a(下排圖示)的活細胞熒光染色照片。


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Goat Anti-Mouse IgG-QD605 Cat: Q2104/Q2104a

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