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QLISA


量子點熒光免疫吸附分析(Quantum dot-linked immunosorbent assay,QLISA)原理與酶聯免疫吸附分析(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)相似,是指利用抗體與相應抗原的特異性結合反應,對樣品進行定性或定量檢測的分析方法。不同的是,ELISA使用酶聯標記物催化顯色底物產生有色產物,利用顯色深淺進行定量分析;而QLISA則采用量子點標記物產生熒光信號,指示特定抗原或抗體是否存在,并利用熒光強弱進行定量分析。


ELISA方法靈敏度高,可進行定量檢測。但操作繁瑣,定量重復性較差,結果易受酶活性及底物穩定性影響。量子點作為新型熒光納米材料運用于QLISA,具有熒光效率高、穩定性高、Stockes位移較大、發射光譜窄而對稱、單一波長多色激發等諸多優秀的熒光特性,可替代ELISA,實現高靈敏多指標同時檢測,且無需顯色操作、方便快捷、重復性高,同時結果可在較長時間內多次激發觀測保持穩定。


與ELISA相似,按照實驗方法分類,QLISA主要也可分為夾心法、間接法、以及競爭法。


夾心法

夾心法常用于檢測大分子抗原(具有多個不同的抗原表位),一般操作步驟為:

1. 將具有專一性抗體(通常為單克隆抗體)吸附固定于塑料孔板上,完成后洗去多余抗體,加入合適的封閉劑以封閉孔板表面空余位點。

2. 加入待檢樣本,若含有對應抗原,則其會與塑料孔板上的抗體特異性結合。

3.  洗去多余樣品,加入另一種專一性抗體(一抗通常亦為單克隆抗體,與之前的專一性抗體合稱配對單抗),與待測抗原進行結合。

4.  洗去多余未結合抗體,加入帶有量子點標記二抗(一般為抗抗體),與一抗結合。

5.  洗去多余未結合二抗,按照量子點標記二抗說明書以肉眼或儀器讀取熒光結果。

夾心法使用了兩種單克隆抗體對抗原不同表位進行識別,因此特異性高,但待測抗原必須是多價抗原,并且有合適的配對單抗,以分別進行夾心,一般不適用于半抗原或小分子抗原。


間接法

間接法常用于檢測抗體,一般操作步驟為:

1.  將已知之抗原吸附固定于塑料孔板上,完成后洗去多余抗原,加入合適的封閉劑以封閉孔板表面空余位點。

2.  加入待測樣本,樣品中若含有對應抗體(一抗),則其會與塑料孔板上的抗原特異性結合。

3.  洗去多余樣品,加入帶有量子點標記二抗(一般為抗抗體),與一抗結合。

4.  洗去多余未結合二抗,按照量子點標記二抗說明書以肉眼或儀器讀取顯色結果。


競爭法

競爭法一般用于檢測小分子抗原,當需要檢測無法獲得配對單抗的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體時,一般也會考慮使用競爭法。一般操作步驟為:

1.  將具有專一性抗體吸附固定于塑料孔板上,完成后洗去多余抗體,加入合適的封閉劑以封閉孔板表面空余位點。

2.  加入待測樣品,樣品中的待測抗原與塑料孔板上的抗體特異性結合。

3.  加入帶有量子點標記的抗原,與塑料孔板上的未結合抗原的多余抗體進行專一性結合,由于塑料孔板上的抗體數量有限,因此樣品中抗原的量越多,則帶有量子點標記抗原可結合的剩余抗體就越少,兩者相互競爭。

4.  洗去樣品與量子點標記抗原,當樣品中抗原越多,代表塑料孔板內留下的量子點標記抗原越少,熒光信號越弱。0


QLISA實例:


圖1,QLISA夾心法原理圖Luo, Y. and B. Zhang 2012




圖2,QLISAELISA比濁法比較Luo, Y. and B. Zhang 2012 ) 




圖3,基于量子點的微陣列技術與使用Alexa熒光染料的結果比較(Morales-Narvaez E. and H. Monton 2012)





圖4,基于量子點的微陣列檢測病原體(Yang, H. and Q. Guo 2009 )



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